树脂吸附法制取Uk尿激酶粗品提取

树脂吸附法制取UK 碱化除沉淀 将男性尿用5mol/L氢氧化钠调pH至碱性，静置1h，虹吸上清液，弃去白色沉淀。 树脂吸附UK 将虹吸的上清液用5mol/L盐酸调pH，加树脂，搅拌1.5h，树脂自然下沉，收集吸附有UK的树脂。 洗涤 用0.1mol/L pH5.5的磷酸缓冲液（上清液体积的10%）搅拌洗涤30min，虹吸除去上清液，再以0.1mol/L pH6.4的磷酸盐缓冲液搅拌洗涤30min，收集树脂。 洗脱 第1次洗脱用氨水搅拌洗脱1.5h，第2次洗脱以同样量的洗脱液搅拌洗脱0.5h，抽滤，收集洗脱液，合并洗脱液，测量其体积。 硫酸铵沉淀 按洗脱液体积加入固体硫酸铵，不断搅拌使其溶解，并使其饱和度达65%，用5mol/L盐酸调pH为8.6，于0～2℃沉淀8h，离心收集，得棕色UK沉淀。 H-UK与L-UK的分离与纯化 将部分纯化的UK300mg(比活1000IU/mg蛋白）溶于10l pH9.0氨水中，加入固体氯化钠调节电导至23mv/cm。将此溶液通过一预先用0.01mol/L磷酸缓冲液-0.2mol/L氯化钠液（pH8.0)平衡的Amberlite-IR938型阴离子交换树脂柱（4×8cm)，流速2l/h。于4℃下收集流出液（无色，比活为17000IU/mg蛋白，活力回收90%)。将流出液用1mol/L醋酸调节pH至4.2，并加蒸馏水调整电导至15.6mv/cm，进行CMC柱层析（2.0×4.0cm）。柱预先用0.1mol/L pH4.2醋酸缓冲液平衡，以20ml/min流速上样，然后用0.1%氨水-0.1mol/L氯化钠溶液洗脱。洗脱液比活为8000IU/mg蛋白，活力回收80%以上。 将比活为8000IU/mg蛋白的UK溶液对0.03mol/L pH6.8磷酸缓冲液透析后参照White法进一步用羟基磷灰石吸附柱层析分离两种UK。羟基磷灰石柱（1.9×2.85cm)用相同缓冲液平衡。样品上柱后用0.1mol/L和0.2mol/L pH6.8磷酸缓冲液分步洗脱，将H-UK和L-UK完全分开。

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